AAV誘導型基因表達載體結合了載體家應用廣泛的AAV載體系統(tǒng)和Tet-On基因誘導表達系統(tǒng)，幫助您在體內體外都能進行四環(huán)素誘導表達實驗。

Tet-On基因誘導表達載體系統(tǒng)是在哺乳動物細胞中進行實時GOI表達的強大工具。我們的Tet-On基因誘導表達載體系統(tǒng)在無四環(huán)素及其類似物（多西環(huán)素）的情況下可以做到GOI幾近完全沉默并且在加入四環(huán)素及其類似物（多西環(huán)素）的情況下快速響應實現(xiàn)GOI表達。這是通過tTS和rtTA蛋白響應四環(huán)素及其類似物（多西環(huán)素）的基因調控功能實現(xiàn)的。當不存在四環(huán)素及其類似物（如doxycycline）的情況下，目的基因幾乎或完全沉默；當往體系中添加四環(huán)素或其他類似物（如doxycycline）時，目的基因得到快速高水平表達。四環(huán)素不存在的情況下時，衍生于TeR（Tet抑制蛋白）和KRAB-AB（Kid-1蛋白轉錄抑制結構域）的融合蛋白tTS結合TRE啟動子，導致基因轉錄抑制。另一方面，四環(huán)素存在時，衍生于突變型Ter抑制蛋白和VP16蛋白（轉錄激活結構域）的融合蛋白rtTA結合TRE啟動子，激活基因轉錄。

AAV誘導表達載體首先以質粒的方式構建并使用E. coli擴增，然后轉染進入包裝細胞。在包裝過程中，位于兩個反向重復序列（ITR）之間的DNA片段與由包裝細胞表達的病毒蛋白進一步包裝成病毒顆粒。位于兩個ITR之間的四環(huán)素誘導基因表達盒包含兩部分：一個四環(huán)素響應因子（TRE）啟動子驅動的用戶自定義GOI，以及一個一個廣泛啟動子或者組織特異性啟動子驅動的tTS/rtTA調控蛋白。當病毒轉導宿主細胞時，兩個ITR區(qū)域之間的序列和其他病毒基因組分由此進入了靶細胞。GOI的表達可通過加入四環(huán)素啟動。AAV包裝時的ITR序列來源于AAV2，這是一種常用的AAV載體構建方式，不影響血清型。另一方面，決定血清型的衣殼蛋白基因由Rep/Cap包裝質粒編碼。

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關于該載體系統(tǒng)的更多信息，請參考以下文獻。

我們的Tet-On基因誘導表達載體系統(tǒng)在無四環(huán)素的情況下可以做到GOI幾近完全不表達，但是在加入四環(huán)素時快速表達。我們的AAV載體是經過優(yōu)化的，可在大腸桿菌中進行高拷貝復制，是一個包裝病毒滴度高，細胞轉導效率高，轉基因高水平表達的載體系統(tǒng)。該載體可用所有已知衣殼蛋白血清型的輔助質粒進行包裝，包裝出來的病毒具有非常高的轉導效率，且具有極高的生物安全性。

類似開關的嚴格基因表達調控：只依賴rtTA的Tet-on系統(tǒng)在沒有誘導劑的情況下，會有明顯的泄露表達。我們的Tet-On基因表達載體可嚴格調控基因的表達，在沒有誘導劑的情況下可將背景泄露表達最小化，并保持該系統(tǒng)對四環(huán)素誘導的高靈敏度。

高水平表達：TRE啟動子可驅動GOI在誘導狀態(tài)下高水平表達。

安全性：AAV是可供選擇的最安全的病毒載體，它是復制缺陷的，不會引起任何人類疾病。

對宿主基因組造成破壞的低風險性：在轉導進入靶細胞后，AAV病毒載體在細胞核保持著游離DNA的狀態(tài)，可以降低宿主基因組被破壞而致癌的風險，使其成為人類體內實驗的理想載體。

高病毒滴度：利用我們的AAV病毒載體可以包裝成高滴度的病毒。我們提供的病毒包裝服務病毒滴度可達到>10¹³ GC/ml。

宿主范圍廣：針對不同來源的常用哺乳動物（如人、小鼠和大鼠）細胞和組織，將我們的AAV載體包裝成對其具有親和性的血清型，可輕易實現(xiàn)高效轉導。但是，某些類型的細胞仍然難以轉導（見下文不足之處），這與所用的血清型有關。

體內外實驗均有效：我們的載體不僅能用于體內活體動物實驗，還具有體外細胞轉導能力。

載體容量?。?/strong>AAV是我們所有病毒載體系統(tǒng)中裝載量最小的。AAV的兩個ITR之間所能容納的最大序列長度是4.7kb。在Tet-On系統(tǒng)中，用于病毒包裝、轉導和四環(huán)素誘導的基因序列另外占用2.1kb，因此留作自定義的GOI長度需要小于2.6kb。

難以轉導特定類型的細胞：當利用合適的血清型進行包裝時，我們的AAV載體系統(tǒng)可以轉導很多不同類型的細胞，包括非分裂細胞。不同AAV血清型對不同類型的細胞具有不同的嗜性，針對某種特定類型的細胞需要特定血清型。

技術復雜：使用AAV病毒載體時，需要在包裝細胞中產生活病毒，然后測定病毒滴度。這些過程相對于常規(guī)質粒轉染，技術難度更高，周期更長。在訂購載體的同時，可以通過訂購我們的病毒包裝服務輕松解決這些問題。

5' ITR: 5' inverted terminal repeat. In wild type virus, 5' ITR and 3' ITR are essentially identical in sequence. They reside on two ends of the viral genome pointing in opposite directions, where they serve as the origin of viral genome replication.

TRE promoter: Tetracycline-responsive element promoter (2nd generation). This element can be regulated by a class of transcription factors (e.g. tTA, rtTA and tTS) whose activities are dependent on tetracycline or its analogs (e.g. doxycycline).

Kozak: Kozak consensus sequence. It is placed in front of the start codon of the ORF of interest to facilitate translation initiation in eukaryotes.

ORF: The open reading frame of your gene of interest is placed here.

SV40 late pA: Simian virus 40 late polyadenylation signal. It facilitates transcriptional termination of the upstream ORF.

CBh promoter: CMV early enhancer fused to modified chicken β-actin promoter. It drives the ubiquitous expression of the downstream tTS/rtTA cassette.

tTS: Tetracycline-controlled transcriptional silencer. This protein binds to TRE promoter to actively suppress gene transcription only in the absence of tetracycline and its analogs (e.g. doxycycline).

T2A: Self-cleaving 2A peptide from thosea asigna virus that allows multiple proteins to be made from a polycistronic transcript containing multiple ORFs separated by T2A. The cleavage occurs through a putative “ribosomal skipping” mechanism.

rtTA: Reverse tetracycline responsive transcriptional activator M2 (2nd generation). This protein binds to TRE promoter to activate gene transcription only in the presence of tetracycline or its analogs (e.g. doxycycline). It has higher sensitivity to the inducing drug and lower leaky activity in the absence of the drug compared to its predecessor.

BGH pA: Bovine growth hormone polyadenylation. It facilitates transcriptional termination of the upstream tTS/rtTA cassette.

Ampicillin: Ampicillin resistance gene. It allows the plasmid to be maintained by ampicillin selection in E. coli.

pUC ori: pUC origin of replication. Plasmids carrying this origin exist in high copy numbers in E. coli.